转基因小鼠的服务

动物模型核心为转基因小鼠的生产提供全方位的原核注射服务。转基因小鼠的生产通常在C57BL/6中进行，其他菌株如FVB或杂交菌株可根据要求提供。转基因注射也可以在客户提供的定制菌株中进行。转基因克隆和BAC重组服务可用于生产转基因。

提交的DNA

对于小于20kb大小的转基因，北卡罗来纳大学动物模型核心设施通常根据客户提供的DNA创建转基因小鼠。应要求提供转基因克隆和纯化服务。BAC转基因dna总是由核心准备用于注射。为了获得最佳数量的起始点，转基因质粒应使用无内毒素系统进行纯化，如Qiagen EndoFree系统(目录#12362)。用限制性内切酶从转基因DNA上切下全部或大部分质粒主链，使转基因DNA通过琼脂糖凝胶电泳与质粒主链容易分离。客户应向设备提供20 μ g的消化DNA。客户还必须提供用于潜在创始人基因分型的引物，并证明当以适当的比例与基因组DNA混合时，该检测方法可以通过PCR检测他们的转基因，模拟每个基因组1个转基因拷贝。

要求BAC转基因服务的客户应与核心主管联系，了解向核心提交BAC克隆的程序。核心的BAC转基因定价包括BAC DNA制备和脉冲场凝胶电泳。

原核的显微镜下注射

在项目工作开始前，所有客户都必须填写“AMC服务申请表格”。转基因DNA将被注射到C57BL/6或FVB胚胎的原核中，并植入假怀孕的受体雌性。幼崽大约在注射后3周出生，并由核心提供基因分型。一旦动物断奶，奠基人就会被转移到客户身上。该设施的原核微注射服务包括最多400个胚胎的注射或生产3个奠基者，以先完成者为准。该设施的目标是为每次实验产生至少3只转基因起始动物。不同的始祖系可能表现出不同的表达水平，有些始祖系可能不会将转基因遗传给后代，而有些则可能根本不表达转基因。3个起始点的产生提供了获得至少1个优良转基因系的合理机会。该设施对创始人及其后代的创始人生产、种系传播或基因表达不作保证。有害的转基因可能导致无法获得奠基者或无法在后代中获得种系传递或表达。 If no transgenic animals are obtained after injection of 400 embryos, the client will be billed for the service and a consultation with the facility director is advised before attempting additional microinjection projects with that transgene. Animal space at UNC must be requested from DLAM and must be secured prior to project initiation. Failure to secure animal space will result in additional charges and could result in the loss of valuable animals.

关于生成转基因小鼠的详细描述请参见:Ittner LM, Götz J。原核注射用于转基因小鼠的生产。Nat Protoc。2(5): 1206 - 2007; 15。