严格和再现性
北卡罗来纳大学生物分子研究中严格和可重复实验的八个步骤:
- 如果使用核心设施，咨询与核心人员在规划阶段。如果您需要帮助开发功率分析，请咨询统计学家，以确保您的结果将得到充分支持。
- 设计你的实验足够的控制(严格)和复制(再现性)。
- 确保你所有的试剂(抗体，细胞系，小鼠)都是充分验证(见下文)。
- 有一个清晰的详细protoco(SOP)和数据分析计划。确保协议被严格遵守或任何偏差都有良好的文件记录。
- 确保进行实验的工作人员或学生训练有素理解每个步骤以及精确执行它们的重要性。
- 只使用良好的仪表，最好由专家人员在核心设施中维护和操作(见上文第1条)。
- 记录所有的步骤、实验中使用的试剂、设备和数据分析方法。确保文档和数据本身都正确地存储在一个安全的数据管理存储库中。
- 承认癌症中心资助基金(e CA016086),动物模型核心，和适当的核心人员在出版物。
UNC动物模型核心的严密性和可重复性指南利用基因工程啮齿动物的研究
- 在规划阶段与核心工作人员协商
- 确保转基因动物的基因分型正确
- 在基因分型试验中始终包括阳性和阴性对照
- 了解菌株中基因修饰的分子细节，确保适当设计基因分型策略以区分可能的基因型
- 注意可能的遗传因素，如母系或父系生殖系重组酶表达可能产生意想不到的基因型
- 为你的转基因菌株保持一个明确的遗传背景
- 动物模型核心总是在确定的遗传背景上提供新的转基因菌株。确保菌落保持在原始背景上，除非在实验中要求引入不同的背景。
- 请注意，来自不同供应商的同一品系的动物在遗传上并不相同，亚品系之间的遗传差异可能会影响动物表型。
- 请注意，随着时间的推移，一个封闭群体内的交叉将导致基因漂变。至少每4代应将群体从基因定义的种群(如贩售动物)杂交回野生型动物。
- 保持完整的育种记录，以跟踪动物谱系的遗传背景。
- 包括适当的实验控制
- 适当对照的选择取决于所使用的转基因品系的性质。在许多情况下，由于遗传背景、病原体状态、微生物群等的一致性，缺乏转基因修饰的窝伴对照将是理想的对照。
- 注意可能影响实验结果的环境变量
- 使用的饲料类型、病原体排除状态和微生物组等变量会对实验结果产生重大影响。注意这些条件，并确保实验设计是为了控制这些变量。
- 确保所有涉及动物的实验都得到机构动物保护和使用委员会(IACUC)以及适用时机构生物安全委员会(IBC)的批准。
额外的资源:
了解美国国立卫生研究院通过严格和透明提高再现性的倡议．（视频）
资源认证计划：https://grants.nih.gov/reproducibility/faqs.htm#V
我应该在我的申请中包括什么样的信息资源认证计划？查阅有关NIH Nexus的博客。
是什么“关键生物和/或化学资源”应用程序的身份验证计划应该解决这个问题吗?关键的生物和/或化学资源包括但不限于动物模型、细胞系、特殊化学品、抗体和其他生物制剂。更多信息请访问NIH网站
美国实验生物学学会联合会的报告《提高研究再现性》指出了研究再现性的三个主要差距:
- 缺乏统一的定义来描述问题
- 对关键实验细节报道不足
- 科学培训的差距