服务概述
提供服务:高质量合成肽，稳定同位素标记肽，PTM和荧光和亲和标记肽，肽库合成肽。合成肽的分析。合成肽的纯化、冻干和引用
核心设施为北卡罗来纳大学和外部用户。
如需更多信息或报价，请联系我们peptides@unc.edu
多肽合成
通常有四个级别的肽纯度，每一个级别的纯度服务于不同的应用:
- 原油肽(没有分析数据，除非另行订购)
- 脱盐肽(纯度通常为50-70%，将提供反相高效液相色谱图谱和质谱数据)
- > 80% HPLC-purified肽(将提供反相高效液相色谱分析图谱和质谱数据)
- > 95% HPLC-purified肽(提供反相高效液相色谱分析图谱和质谱数据)。
所有多肽从树脂裂解后，通过沉淀、有机溶剂洗涤和冻干预纯化。粗肽和纯化肽都以冻干粉的形式输送。粗肽的周转时间一般为1-2周，纯化肽的周转时间一般为2-3周。有10、25、50、100 μ mol四种合成尺度可供选择(如需大规模合成，请与我们联系)。对于每一个鳞片，肽都可以以粗的、脱盐的或纯化的形式获得。地图有粗的和脱盐的两种。
肽储存与处理
短时间内，固体多肽可在4oC. For a long - term storage长期存储oC或-80o建议为C，特别是含有M、C、W、D或N残基的肽。肽溶液应在实验前准备好，如果需要，可在-80℃下保存oC.这些溶液的冻融循环次数应减少到最低限度(每次循环后，溶液应检查有无沉淀迹象)。含有M、C、W、D或N残基的肽段(特别是DG、DD、DN、NG、NN、ND序列)在溶液中不稳定。含有M、C或W残基的多肽的稳定性可以通过添加还原剂(如DTT或BME)来改善。
如果肽在水或水基缓冲液中的溶解度低，肽可以溶解在含有有机溶剂(例如乙腈、甲醇、乙酸、DMSO、DMF)的溶液中，然后用水稀释到所需的浓度。
不同纯度合成肽的典型应用
粗的和“脱盐”的肽通常用于高通量筛选(例如对大量多肽进行初步筛选以产生先导物)。当盐干扰分析或需要对肽浓度进行良好估计时，首选脱盐肽。
- > 80%的纯肽作为抗体生产、纯化和阻断的抗原，作为亲和纯化的配体，用于酶底物研究、表位定位、酶联免疫吸附试验和生物测定
- > 95%的纯肽通常用于定量生物分析，作为定量研究中的酶底物/抑制剂，作为电泳、色谱标准的标记，在NMR、ELISA、结晶、ITC和SAR研究
表中给出了每个级别和纯度的预期产率范围。
合成规模 |
典型产率范围(mg) |
|||
|---|---|---|---|---|
(在µ摩尔) |
原油 |
脱盐 |
纯度 |
纯度 |
10µ摩尔 |
3日- 15日 |
2 - 7日 |
1 - 6 |
0.5 - 3 |
25µ摩尔 |
10 - 30 |
6 20 |
男童 |
1－10 |
50µ摩尔 |
20 |
12-40 |
4-30 |
2 - 20 |
100µ摩尔 |
40 - 120 |
25 - 80 |
60 |
4-40 |
肽纯度不应与肽含量．例如，100%纯肽，含有水(通常为3-10%)三氟乙酸酯或醋酸反离子，也可能含有残留的三氟乙酸酯。多肽通常具有吸湿性，在储存和处理过程中含水量会增加。
含改性氨基酸的多肽的合成
我们可以在合成肽中加入多种改性氨基酸。主要的限制是必需的fmoc -氨基酸衍生物的商业可用性。由于加入改性氨基酸往往会增加肽合成的难度，这可能导致产品的产量或纯度降低。在某些情况下，结合不寻常氨基酸的并发症可以通过其在肽序列中的位置最小化。通常修饰残基的首选位置是肽序列的n端(特别是磷氨基酸和三甲基赖氨酸残基)。在肽中加入修饰氨基酸也会产生额外的费用，通常是修饰氨基酸的Fmoc衍生物的价格(详情请与我们联系)。
地图
多抗原多肽(MAPs)提供了一种利用合成多肽提高抗体的替代方法。肽表位附着在4或8个分支核心(3或7个赖氨酸残基的核心)上，会产生具有高度定位表位密度的三维分子，而没有额外的肽序列。MAPs(分子大小在5到15 kDa之间)适合于直接产生抗体，而不需要与载体蛋白偶联。在MAPs中多个抗原表位副本已被证明能产生强烈的免疫原性反应(见参考文献6和7)．
肽库的合成
我们可以帮助设计一个肽库。我们可以在2-3周内合成≤120个粗肽库，对于更大的库，我们需要每120个多肽额外2周。肽以冻干粉的形式在单独的小瓶中或以冻干等价物的形式在eppendorf管中交付(额外费用)。用质谱法和反相高效液相色谱法检测1/12库肽的质量。如果用户需要额外费用，我们可以检查其他图书馆多肽的质量(见价目表)。
合成肽的分析
我们可以分析用户提供的样品的粗或HPLC纯化多肽使用分析HPLC和质谱。
纯化，冻干，阿里引用
我们还可以用反相制备高效液相色谱法纯化用户提供的粗肽。我们将提供纯化后肽的纯化谱数据和分析数据。纯化后的多肽将被冻干，并可根据用户要求进行报价。我们可以使用带有防静电装置的微天平精确称重冻干肽，并使用快速真空真空(每次运行多达40支)在1.5mL或2mL eppendorf管中制备冻干分配量。
肽微阵列的打印
我们有从生物素化合成肽库打印肽微阵列的经验(看到裁判。3 - 5）在链霉亲和素涂层的显微镜载玻片上，使用GeneMachines OmniGrid 100阵列。该阵列可以打印约4000个点每显微镜载片(最多20张幻灯片每次运行)。一次运行需要8个小时，具体取决于阵列配置、样本、斑点和幻灯片的数量。样品是从384孔板上打印出来的。
认可HTPSA核心设施
请在您的演讲和出版物中使用HTPSA核心设施。这将帮助我们展示核心设施对当地科学界的价值。我们通过大学癌症研究基金和癌症中心支持基金获得北卡罗莱纳大学Lineberger综合癌症中心的持续支持。因此，由北卡大学结构生物学中心支持的出版物必须获得NIH的资助P30CA016086并按照本条例的规定提交PubMed CentralNIH公共获取政策．
承认的例子
多肽合成是在北卡罗莱纳大学教堂山分校的高通量多肽合成和阵列核心设施中进行的。北卡罗莱纳生物技术中心机构发展基金为发展这一设施提供了资金。