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一般建议

如果存在保存元数据的文件格式,请使用它。元数据是关于数据的数据,在这里通常指的是获取设置。用元数据保存文件将允许你自动记录所有这些采集设置,并重用它们。当你试图确保实验的再现性时,这是非常有用的。

永远不要将图片保存为jpeg格式。这种文件格式适用于亲人、可爱的动物和美丽的日落的照片,但不适用于科学数据。除了丢失所有详细描述你如何拍摄照片的元数据外,你还将以一种“有损”的方式压缩数据,这意味着它将被不可逆转地修改和降级。

针对不同软件和范围组合的具体建议:

蔡司(LSM700, LSM710):

使用czi格式。这保留了图像获取的元数据,让你重新使用设置,可以被我们的反卷积软件(Autoquant)很好地读取,可以在斐济打开,它的元数据可以被蔡斯的免费软件(Zen lite black)在Windows 10上正确读取。虽然FIJI可以访问.lsm或.czi文件的元数据,但其格式使其难以读取。

Volocity (BX61 - Neville, IX81 - Luna)

Volocity不保存图像元数据,因此您需要自己记录用于获取数据的条件(曝光、增益、偏移、分块、通道、BX61上的ND过滤器、IX81上的LED电源)。有关应该跟踪的设置的更多信息,请联系MSL工作人员或阅读我们的指导方针。

使用Retiga相机获取的图像(彩色)

保存图像为TIFF格式。确保你点击了“选项…”按钮,并确保点击了“Convert to RGB for publication”,取消点击了“Scale”。每次保存一个文件子集时都必须这样做,因为如果不每次都这样做,即使保存选项没有被修改,软件中有一个bug会导致错误地保存图像。为了得到最好的结果,平场你的亮场图像。可以找到这样做的指令和宏链接在这里

使用滨松相机获取的图像(荧光)

以OME-TIFF格式保存图像,而不是TIFF格式。如果您将使用这些图像在斐济进行测量,和/或在演示或论文中显示,我们已经编写了Volocity到斐济转换宏,可用在这里

如果要解卷积Volocity (BX61)中获得的z堆栈,首先使用Imaris文件转换器将它们转换为Imaris文件格式,然后在Autoquant中打开它们,这会更容易一些。

变形金刚(IX81 - Luna, IX70 - Neville):

当您保存一个文件时,它将在多维实验中为每个通道、时间点和位置保存单个TIFF文件。如果您正在进行Z堆栈,那么每个保存的文件都将是一个包含多个Z切片的超堆栈。除了所有这些文件,软件还会保存一个“。当你按下“获取”按钮时,你就会打开“文件”。这个nd文件非常重要,所以请确保将它与其相应的数据集放在一起。如果将nd文件拖放到FIJI中,FIJI将读取该文件并将实验数据正确地组织到具有适当尺寸的超栈中。此外,nd文件可以由我们的反卷积软件(Autoquant,但请参阅下面的说明)以及Imaris文件转换器读取。

如果您有许多位置和时间点,您可能会发现使用宏将数据重新组织为单个超栈(每个位置一个)更容易进行后续分析。如果你需要这样做,请向MSL工作人员寻求帮助。

要保存所有设置,请确保在进行多维获取时保存“状态”文件。

Metamorph文件的反褶积注意事项:Metamorph中有一个bug,某些类型的获取会导致文件名与nd文件信息不匹配,并且不能在Autoquant中正确读取。请向MSL的工作人员询问我们编写的脚本,这将允许你解决这个问题。

Volocity (IX70 - Moody)[已退休]:

注:该显微镜已于2021年7月退役。这里提供的信息仅供参考。

将图像保存为ome - tiff格式。如果您将使用这些图像在斐济进行测量,和/或在演示或论文中显示,我们已经编写了Volocity到斐济转换宏,可用在这里

高级检查员(超显微镜II -斯内普):

确保开启自动保存选项。数据将保存在一个文件夹中,其中有许多OME-TIFF文件,每个通道、Z位置和位置都有一个文件。不要从文件夹中删除任何这些文件,也不要将任何文件放入此文件夹,以确保适当的元数据保留。注意,元数据将被写入对应于每个通道和位置的第一个Z位置的图像文件。

您需要自己记录所有元数据:激光功率、光片NA、光片宽度、通道、光片边数、光片数量、Z间距、曝光、平铺位置重叠(如果适用)、裁剪(如果适用)。

如果你在做一个大的平铺,不小心点击了Z位置的“分割”设置,MSL已经编写了一个宏来对结果元数据进行排序(如果你不重新组织数据,每个Z位置将被解释为一个不同的通道)。如果你需要的话,请告诉我们。

cellSens (IX70 - Moody)[已退役]:

注:该显微镜已于2021年7月退役。这里提供的信息仅供参考。

保存为。vsi格式。注意,这会产生一个带有元数据的vsi文件、一个文件夹和该文件夹中的一个.ets文件。

只要您将所有文件放在一起,元数据就会被保留,因此请确保您不会在移动某些文件时遗漏其他文件。要在斐济打开。vsi文件,使用File/Import/Bio-Formats。将.vsi文件拖到斐济将不起作用。将.ets文件拖到斐济将加载文件和元数据,但名称将是一个通用名称(如frame_t_0.ets),而不是您用来保存图像文件的名称。

Autoquant(工作站- Minerva):

将输出以Bitplane .ims文件格式保存。对于在IX81或IX70上拍摄的图像,使用32位浮点选项;这对于在图像之间进行适当的强度比较是绝对关键的.对于在其他作用域上拍摄的图像,可以使用32位浮点数或16位无符号整数。这些格式可以通过Imaris打开,因此对于3D分析非常有用。它们还可以被斐济读取,并生成一个文件。其他格式的结果是多个文件,和/或不那么方便的格式。

MSL可以提供在批处理模式下使用Autoquant的说明,这将大大加快许多文件的反褶积。